最新澳门网址和探针的实验要求

浏览:92 发表时间:2020-02-20 00:00:00

最新澳门网址和探针的实验要求
    PCR是分子生物学实验中最常使用的实验方法。最新澳门网址和探针的设计是实验者进行PCR扩增时必须要了解的一个知识点。
1.  由于最新澳门网址原因导致PCR扩增有非特异性扩增
    最新澳门网址特异性差是PCR有非特异性扩增的一个主要原因。特别是模板为基因组等复杂模板时,对最新澳门网址设计有较高要求。可以通过:
1)提高退火温度;
2)选择模板其它区域重新设计最新澳门网址;
3)如果是做染料法荧光定量PCR的,最新澳门网址纯化方式要为Page,HPLC等纯化级别。
2.  PCR扩增后有最新澳门网址二聚体
    染料法荧光定量PCR对最新澳门网址设计上要求较高。
1)最新澳门网址结构上不能有较严重的二聚体及发夹结构;
2)PCR体系中最新澳门网址浓度一般在0.1um-1um,一般为0.2um。如果最新澳门网址浓度要求更低,可以尝试在0.05um-0.1um;
3)提高退火温度。.
3.  荧光定量PCR的最新澳门网址设计要求
1)最新澳门网址GC含量尽可能在40%-60%,Tm值最好取60℃左右;
2)避免最新澳门网址自身或与最新澳门网址之间形成4个或以上连续碱基配对,同时没有形成发夹结构;
3)最新澳门网址长度在20-30bp;
4)目的片段长度一般设计为100-200bp;
5)最新澳门网址特异性要较高。
4.  Taqman探针的设计要求
1)Tm值最好在65-70℃(MGB探针可以降低Tm值);
2)探针的5’端应避免碱基G;
3)探针长度最好在20-30bp;
4)探针尽可能的靠近最新澳门网址位置;
5)保证探针的高度特异性。


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